产品货号：
BTN2306502
中文名称：
RNA-LNP包封率检测试剂盒
英文名称：
RNA-LNP Encapsulation Efficiency Assay Kit
产品规格：
500T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是基于RiboGreen染料法对RNA-LNP包封率进行测定的试剂盒。
游离的、未包封的RiboGreen几乎不产生荧光，但与RNA结合后会在Ex490nm/Em525nm下产生荧光，并且荧光强度跟RNA浓度成线性关系，因此可以通过检测总RNA浓度和包封后游离的RNA的浓度，即可计算出RNA-LNP包封率。
- 即开即用，用户不需要优化条件。
- 高RiboGreen浓度测定的线性范围在2.5ng/mL-50ng/mL，低RiboGreen浓度测定范围在10ng/mL-1μg/mL，合计线性范围在2.5ng/mL到1μg/mL之间。
- 提供RNA标准品，用于制作标准曲线。
- 抗核苷酸、盐类、尿素、乙醇、氯仿、表面活性剂、蛋白和琼脂糖干扰。但不能抗DNA干扰，故用户需先除去样本中的DNA。
- 跟荧光酶标仪、标准的荧光光度计或滤光荧光计兼容。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| RiboGreen染料 | 100mL |
| 20×TE浓缩液(RNA级) | 25mL |
| RNA-LNP包封率测定用标准品 | 2μg |
| 10×LNP溶解液 | 25mL |
保存：-20℃，避光，有效期6个月。
本试剂盒足够200次0.2mL体积的RiboGreen高浓度检测，足够2000次0.2mL体积的RiboGreen低浓度检测。
RNA-LNP样品，1×PBS，荧光光度计/荧光酶标仪
- 核酸可以跟玻璃结合，故避免使用任何玻璃器皿，包括石英比色皿。
- 将收集到的RNA-LNP加载到预先水化的透析袋中(截留分子量MWCO =20kDa)。
- 切勿刺破或损坏透析袋的膜。膜损坏将导致RNA-LNP丢失。
- 将透析袋放入1×PBS中透析至少2小时。
- 透析后，在无菌生物安全柜中，将RNA-LNP转移到干净的离心管中。
- 用0.22μm注射器过滤器对RNA-LNP进行无菌过滤后待用。
二、溶液配制
- 配制50mL TE缓冲液：在一干净的RNase-free离心管中，加入47.5mL自备DEPC水，再加入2.5mL天净沙20×TE浓缩液（RNA级），颠倒20次摇晃混匀得TE缓冲液。没用完的本溶液需要-20℃保存。用户可以选择配制其他体积，只是各成份加入量需要相应调整。
- 新鲜配制20mL LNP溶解液：一干净的RNase-free离心管中，加入18mL TE缓冲液，再加入2mL 10×LNP溶解溶液，颠倒20次摇晃混匀得LNP溶解液待用。
- 新鲜配制RiboGreen染液：每个测试需要本溶液100μL，每次实验多少测试请参考第10步，根据测试反应数计算所需本染液的体积。下面以配制1mL为例：在1.5mL离心管中加入5μL RiboGreen染料，再加入995μL TE缓冲液，颠倒20次混匀后待用，此溶液需即配即用。
- 配制高浓度的RNA标准液：在本试剂盒提供的天净沙RNA定量用标准品管中，加入1mL上步制备的TE缓冲液，涡旋振荡1分钟得浓度为2μg/mL的RNA标准液H。没有用完的本标准液需要放-80℃保存。
- 配制低浓度的RNA标准液：在另一新离心管中，加入950μL TE缓冲液和50μL RNA标准液H，涡旋振荡1分钟得浓度为100ng/mL的RNA标准液L。没有用完的本标准液需要放-80℃保存。
三、样本检测
- 设置反应：如果有N个待测样本，每个样本做1个总RNA测定（和1个游离RNA测定，每个测定做1次重复，则需要做2N检测，再做5～9个样的标准曲线检测。如果做9个样的标曲，则在2N+9个96孔板的微孔中，按下表加入各成份（下面以N=2为例）。
孔号 RNA样本 TE工作液 RNA终浓度 1 0μL RNA标准液L 100μL 0ng/mL 2 1μL RNA标准液L 99μL 1ng/mL 3 2μL RNA标准液L 98μL 2ng/mL 4 5μL RNA标准液L 95μL 5ng/mL 5 10μL RNA标准液L 90μL 10ng/mL 6 25μL RNA标准液L 75μL 25ng/mL 7 50μL RNA标准液L 50μL 50ng/mL 8 75μL RNA标准液L 25μL 75ng/mL 9 100μL RNA标准液L 0μL 100ng/mL 1#样-R总 1#样100μL 不加 待测 1#样-R游 1#样100μL 不加 待测 2#样-R总 2#样100μL 不加 待测 2#样-R游 2#样100μL 不加 待测 - 在每孔中加入100μL RiboGreen染液。
- 将孔板放入酶标仪中，涡旋混合1分钟，然后静置4分钟。
- 在激发/发射波长=480nm/520nm下测量荧光强度。
- 以RNA浓度为横轴，以荧光读数为纵轴，绘制标准曲线。
- 根据标准曲线计算每个出待测样本的总RNA浓度（R总孔）和游离RNA浓度（R游孔）。
- 根据公式包封效率%＝(总RNA浓度－游离RNA浓度)/(总RNA浓度)*100%。
如果待测样本的浓度在标曲外，标曲的浓度需要适当调整，本制品合计线性范围在2.5ng/mL到1μg/mL之间。如果待测样本高于此范围，则需要适当稀释后再测试，使得样本的读数在线性范围内。如果低于线性范围，则需要测试前浓缩样本，使样本的读数在线性范围内。
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